SENSIBILIDAD DE LAS TÉCNICAS INMUNOANALÍTICAS - SEGUNDA PARTE

Versión para impresiónVersión en PDF

SENSIBILIDAD DE LAS TÉCNICAS INMUNOANALÍTICAS - Segunda parte

Factores que afectan la sensibilidad

Presentamos todos los factores que afectan la sensibilidad de los inmunoanálisis que serán luego tratados separadamente en los próximos casos prácticos.

  1. La potencia del anticuerpo. La relación de Ka del anticuerpo o Ka intrínseca promedio en el caso de los anticuerpos policlonales y la concentración molar de las inmunoglobulinas.
  2. La concentración molar del anticuerpo en la inmunorreacción primaria.
  3. La concentración molar del analito de la inmunorreacción primaria.
  4. La concentración molar del trazador o conjugado. En los sistemas de inmunoanálisis competitivos (IAC) o inmunométricos (IM) que se basan en una amplificación de la señal, será la concentración molar del antígeno o del anticuerpo que interviene en la inmunorreacción primaria provistos por el fabricante.
  5. Temperatura a la que se realizan los ensayos (Temperatura ambiental, del baño o estufas de incubación en técnicas manuales).
  6. El pH y la fuerza iónica del medio donde transcurre la inmunorreacción primaria.
  7. El tiempo en que transcurre la inmunorreacción primaria y si la reacción llega o no, al equilibrio. Exceso o defecto del tiempo de reacción o incubación establecida por el fabricante de los reactivos.
  8. Conservaciónde la cadena de frío de los reactivos estipulada por el fabricante.
  9. Adicionar un paso de lavado en una etapa intermedia fuera del protocolo del fabricante.
  10. Tipo de sistema: competitivo o inmunométrico ¿Qué sucede con los ensayos de difusión en gel como en las técnicas de inmunodifusión radial (IDR)?
  11. Ensayos inmunoanalíticos basados en un punto de corte o cut-off.
  12. Precisión de dispensado de reactivos o muestras en los equipos automáticos o la precisión de las micropipetas automáticas en técnicas manuales.
  13. Calidad del agua de dilución de reactivos en equipos automáticos.
  14. Deterioro del agua de dilución de reactivos en equipos automáticos.
  15. Contaminación bacteriana o fúngica en el conjunto de tubos y cañerías de los equipos automáticos.
  16. Contaminación bacteriana o fúngica de los reactivos o controles de calidad (QC).
  17. Estabilidad de los reactivos durante el tiempo que el fabricante estima, previo al vencimiento.
  18. Almacenamiento de los reactivos o muestras.
  19. Estado de funcionamiento (temperatura y su estabilidad) de las heladeras, freezers o congeladoras, lugar y posición de almacenamiento de los reactivos y muestras dentro de las mismas. (especial atención en la posición y el tiempo de almacenamiento de las placas de IDR).
  20. Estructura de la molécula que se va a dosar. Proteína globular, anticuerpo, hormona esteroidea o tiroidea.
  21. Estabilidad de la molécula que se va a dosar.
  22. Sistema de separación (eficiencia de la separación de la fracción libre de la unida en el caso de los sistemas inmunoanalíticos heterogéneos), ej., aspirado o volcado, centrifugación, lavado, separación magnética, etcétera.
  23. Tipo de señal que se va a medir (radiactividad, fluorescencia, color, quimio- luminiscencia, electroquimioluminiscencia, turbidez, banda de precipitación, etcétera).
  24. Utilización de sistemas inadecuados para medir el diámetro de precipitación en inmunodifusión radial.
  25. Estado de la lámpara de los microscopios de fluorescencia.
  26. Estado de la lámpara y filtros del espectrofotómetro.
  27. Estado del cristal de centelleo y fotomultiplicador (PMT), en el caso del contador de pozo (Gamma Counter) para la medición de radioisótopos y el PMT de los instrumentos de quimioluminiscencia y electroquimioluminiscencia.
  28. La ganancia o la atenuación del contador de pozo, y de los instrumentos de medición de quimioluminiscencia y electroquimioluminiscencia.
  29. La elección de las condiciones de medición del contador de pozo (Gamma Counter), que utiliza la condición de mayor eficiencia con el cumplimiento de los test estadísticos de Dixon y Poisson.
  30. Pérdida de eficiencia de la capacidad de separación a causa de la platina magnética en los ensayos de separación magnética.
  31. Estado de conservación y concentración de los anticuerpos marcados con fluoresceína. Solución de trabajo óptima.
  32. Iluminación ambiental en el lugar de trabajo con técnicas de EIA, ELISA e IF.
  33. Forma de utilización de las micropipetas automáticas.
  34. Prolijidad y órden operativo.

Tal vez, algún colega preguntará: ¿todos estos factores afectan la sensibilidad de un inmunoensayo?

La respuesta es "SÍ", existen casos concretos y cotidianos en los que la pérdida de sensibilidad se debe a algunos de los factores enumerados o a la interrelación entre varios de ellos. Y para agregar uno más, como un "Bonus" adicional, es precisamente que el operador tenga un día de inspiración, concentración y prolijidad en la utilización de las micropipetas automáticas en una técnica manual, porque también influye.

No hay que alarmarse, somos conscientes de que algunos de los factores enumerados dependen de los fabricantes de los reactivos y los instrumentos, y el mantenimiento deficitario que se les da; aunque muchos dependen de las políticas de calidad de los laboratorios y otros, del operador.

Como siempre mencionamos, no es un problema que ello ocurra, sino saber que ocurre, y conocer los factores permitirá garantizar la calidad de nuestro trabajo y la reputación del laboratorio.

También es importante conocerlos a la hora de tercerizar el principal activo del laboratorio (muestras de los pacientes) a un laboratorio de mayor complejidad, simplemente para saber qué tenemos que auditar para que el procesamiento de la muestra cumpla con los estándares de calidad y los requerimientos que merecen las muestras de nuestros pacientes, nuestra reputación y el prestigio profesional.

En los siguientes casos prácticos comenzaremos a detallar qué parte del fundamento analítico de los métodos se afecta en cada uno de los casos.

Autor: Dr. Eduardo E. Castellani